產(chǎn)品介紹
概述
采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)李斯特菌屬特異性基因設(shè)計(jì)引物和探針。PCR擴(kuò)增過程中，與模板結(jié)合的探針被Taq酶分解產(chǎn)生熒光信號(hào)，熒光定量PCR儀根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)繪制出實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線，從而實(shí)現(xiàn)李斯特菌屬在核酸水平上的定性檢測(cè)。
檢測(cè)步驟
1、核酸提取????????
1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。
2）冷卻至室溫，吸取上清備用或者置于-20℃保存。
2、反應(yīng)體系配置
從試劑盒中取出List預(yù)混液，充分融化，渦旋后短暫離心，然后將陰性對(duì)照、樣品的DNA提取液、陽(yáng)性對(duì)照各取5μL分別加入PCR管或PCR板中，蓋好管蓋或板膜，短暫離心，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3、PCR擴(kuò)增???????
PCR管或PCR板置于PCR儀上，推薦反應(yīng)程序設(shè)定如下：反應(yīng)體系為25μL，在第二步每個(gè)循環(huán)60℃時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)，檢測(cè)通道選擇CY5。
第一步 | 第二步 | ||
1次 | 45個(gè)循環(huán) | ||
95℃ | 95℃ | 60℃√ | 72℃ |
5min | 15s | 30s√ | 30s |
注：使用ABI系列PCR儀器，如果不添加ROX，“passive reference”和 “quencher”均選擇“none”。
注意事項(xiàng)
1、實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，規(guī)范操作。
2、本品各組成成分均不得與其他產(chǎn)品或不同批號(hào)產(chǎn)品中的相應(yīng)組成成分進(jìn)行混用。
3、基因變異可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
4、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、試劑污染、樣品交叉污染都可能會(huì)造成假陽(yáng)性結(jié)果。
5、恰當(dāng)處理實(shí)驗(yàn)過程中的廢棄物和擴(kuò)增產(chǎn)物。
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