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適用范圍?

維生素 B5 (泛酸)檢測試劑盒適用于奶粉中添加泛酸（維生素B5）含量的定量分析。該試劑盒可進(jìn)行96次測定。?

實驗原理

泛酸（維生素B5）檢測試劑盒采用微生物方法定量檢測奶粉中添加泛酸的含量。微生物檢測體系與國際規(guī)范保持一致。植物乳桿菌的生長離不開泛酸，其生長強(qiáng)度與樣品中泛酸的含量有關(guān)，將含有植物乳桿菌的泛酸檢測培養(yǎng)基、樣品或標(biāo)品加入到微孔中，37℃避光孵育，植物乳桿菌開始生長，直至泛酸被完全消耗，24小時完成孵育。采用酶標(biāo)儀讀取610-630nm或540-550nm下樣品的渾濁度，將樣品濁度與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比即可得到樣品中泛酸含量。

1、標(biāo)準(zhǔn)品配制?

1）打開無菌水瓶蓋：沿著箭頭方向向上推開藍(lán)色蓋帽，逆時針拉開鋁塑蓋，取下整個蓋帽，然后打開瓶塞，將瓶塞內(nèi)側(cè)朝上放置。

2）打開泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品瓶蓋，取xmL無菌水加入標(biāo)準(zhǔn)品瓶中（x值見標(biāo)準(zhǔn)品瓶包裝標(biāo)簽），蓋上瓶蓋，振蕩使標(biāo)準(zhǔn)品充分溶解，即為標(biāo)準(zhǔn)品工作液。

3）取6個無菌管（1.5或2.0mL），將標(biāo)準(zhǔn)品工作液按照說明書表格進(jìn)行稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品必須現(xiàn)配現(xiàn)用。?

?*標(biāo)注曲線中已經(jīng)包含樣品40倍的提取稀釋倍數(shù)。?

2、檢測培養(yǎng)基的配制?

1）打開培養(yǎng)基瓶蓋，用無菌鑷子取出干燥劑并丟棄。?

2）將10mL無菌水（必須取自試劑盒中）加入泛酸檢測培養(yǎng)基瓶中，蓋緊瓶蓋，振蕩混勻。?

3）保證瓶蓋密閉的前體下，95℃水浴加熱5min，然后快速冷卻至室溫（低于30℃）。?

4）使用0.22μm無菌濾膜過濾全部培養(yǎng)基，用15mL無菌離心管收集全部濾液。?

5）取出凍干菌株，沿著箭頭方向向上推開藍(lán)色蓋帽，逆時針拉開鋁塑蓋，取下整個蓋帽，輕輕打開瓶塞，將瓶塞內(nèi)側(cè)朝上放置；向菌株瓶內(nèi)加入1mL無菌水（必須取自試劑盒中），用移液槍吹打混勻，取其中的YmL（Y值見菌株包裝瓶標(biāo)簽）加入過濾后的培養(yǎng)基中，振蕩混勻，即為檢測菌液（檢測菌液須現(xiàn)配現(xiàn)用）。?

注：如果培養(yǎng)基在處理的過程中出現(xiàn)較大體積的損失時，加入的凍干菌株體積需要做相應(yīng)比例的調(diào)整。為杜絕實驗室污染，菌株瓶中剩余的菌再用瓶塞密封，及時清理出實驗室或者高壓滅菌處理；制備的檢測菌液如有剩余，也需要及時清理出實驗室或者高壓滅菌處理。?

3、檢測步驟

注：加入微孔板中的樣品必須為無菌樣品（使用試劑盒中提供的無菌水進(jìn)行稀釋）。?

1）取出所需數(shù)量的微孔條置于微孔架上，將剩余微孔板條放回鋁箔袋中密封，2-8℃儲存。?

2）依次將140μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、140μL檢測菌液加入微孔中（用標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液潤洗槍頭），然后用粘膠薄膜蓋好微孔條（揭開粘膠薄膜的保護(hù)層，用手或壓舌板將粘膠薄膜壓平，使其充分封閉微孔板條）。注:保證粘膠薄膜和微孔的封閉性，特別注意微孔的邊緣部分。?

3）在37℃培養(yǎng)箱中避光孵育24小時。?

4）輕輕來回顛倒混勻微孔板，使菌液充分混勻，然后用一只手將微孔條固定于微孔架上，另一只手自右上方沿對角揭開粘膠薄膜，靜置2min待氣泡全部消去（較難消去的小氣泡用移液槍吸出）后用酶標(biāo)儀在610-630nm或540-550nm下測量渾濁度。?

注：孵育完成后，微孔板可在冰箱中保存的最長時間為48h，然后用酶標(biāo)儀讀數(shù)。